包涵体蛋白纯化试剂盒

蛋白纯化表达实验技术介绍

一、技术概览

蛋白纯化表达技术通过基因工程手段，在宿主细胞（如大肠杆菌）中高效表达目标蛋白。该技术结合亲和层析（如Ni-NTA纯化）和物理化学方法（如超声破碎、离心分离），以获取高纯度蛋白。

二、实验目的

本实验旨在利用Rosetta(DE3)感受态细胞与IPTG诱导表达系统，通过SDS-PAGE电泳与考马斯亮蓝染色验证表达情况。最终通过Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白，为功能研究、结构解析及物开发提供高质量蛋白样品。

三、实验流程详解

1. 质粒转化步骤：

（1）将Rosetta(DE3)感受态细胞置于冰上融化。

（2）将质粒加入感受态细胞中，并轻轻旋转混匀，冰浴30分钟。

（3）将离心管置于42℃水浴中热激80秒，然后迅速转移到冰浴中冷却，约维持三分钟。注意摇动离心管动作需轻缓。

（4）加入无菌无抗生素的LB培养基，混匀后于37℃下振荡培养约一小时。

（5）将菌液均匀涂布于含抗生素的LB平板上，待液体吸收后，室温下倒置平板并放入生化培养箱过夜培养。

2. 扩大培养与诱导表达：

（1）挑选阳性单菌落进行液体培养基扩大培养，并加入相应抗生素。

（2）待培养基变得混浊时，加入IPTG诱导剂进行诱导表达约三小时。

3. 蛋白提取与破碎：

通过超声破碎法破碎菌体并释放蛋白。调整超声条件以确保细胞充分破碎而不损伤蛋白。离心后分离上清液和沉淀。

4. 蛋白表达形式鉴定：通过SDS-PAGE电泳分析诱导前后的蛋白样本，并通过考马斯亮蓝染色进行可视化。分析上清液和沉淀中的蛋白分布。

5. 蛋白纯化：采用Ni-NTA亲和层析法纯化目标蛋白，详细步骤参考相关纯化试剂盒。包括结合、洗涤和洗脱等步骤。

6. 蛋白浓度测定：使用Nano-800或其他相关仪器测定蛋白浓度。

四、技术优势概述

本实验技术具有如下优势：灵活的诱导条件以适应不同蛋白的可溶性表达或包涵体优化；高纯度蛋白满足结构生物学研究需求；快速的表达验证确保在一天内完成分析。

五、应用范围

本技术适用于重组蛋白的生产与优化、抗体开发（如抗原制备与纯化）、酶学研究中活性蛋白的获取与功能验证等领域。

六、代表性实验结果简述

经过本实验技术处理后的样品，通常能够获得高纯度、高质量的目标蛋白，为相关研究领域提供可靠的实验材料。具体实验结果视不同实验条件和样本差异而定。

七、实验材料提供要求

客户提供以下材料：

1. 细胞样品（数量需满足实验需求）；

2. 物种信息及基因信息；

实验过程中使用的试剂和仪器均应符合相关标准和规范以确保实验结果的准确性和可靠性。