凝胶层析的原理是什么_凝胶过滤层析

柱层析技术也称为柱色谱技术。通过一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗来的过程中，根据混合物中各组分在固定相和流动相中的分配系数不同，经过多次反复分配，将不同组分逐一分离。

柱层析分离净化的实验技巧和方法：

一、操作前的准备

1. 选择合适的柱子规格和填充基质，根据样品的性质和含量进行具体分析。

2. 准备好所需的溶剂和样品，选择合适的淋洗剂。

二、柱层析操作方法的选择

1. 根据样品的性质和分离要求，选择合适的操作模式，如常压分离、减压分离和加压分离。

2. 对于加压柱，适合小于100-200g产品的纯化，但需注意使用双链球加压，以防止危险。

3. 减压柱适用于任何量的过柱，但需减小流动相极性过柱。

4. 常压柱是分离效果最好的模式，但时间也最长。

三、柱子规格的选择

1. 市场上的柱子，其径高比一般在1:5～10范围。填料量一般是样品量的30～70倍，具体的选择要根据样品的性质和含量进行。

四、装柱

1. 装柱主要有湿法和干法两种，无论哪种方法，都应确保柱子装的比较结实，没有气泡。

2. 装完的柱子应该有适度的紧密，并且一定要均匀，不然样品就会从一侧斜着流动。

3. 柱中不能有大气泡，如有小气泡没太大的影响，因为加压或减压可以消除。

4. 忌讳的是开裂，开裂会影响分离效果，甚至报废。

五、上样

上样有干法和湿法之分，干法就是直接将样品溶解后加入少量硅胶拌匀再加入柱子顶部。湿法就是将样品和硅胶混合后一起加入柱子顶部。

六、溶剂的选择

选择一个合适的溶剂系统是柱层析分离的关键。常用的溶剂系统包括乙酸乙酯：石油醚系统、甲醇：氯仿系统等。对于极性小的样品，可使用乙酸乙酯：石油醚系统；对于极性较大的样品，可使用甲醇：氯仿系统。还需考虑溶剂的极性、亲合性和分离度等因素。

七、淋洗液的收集和浓缩

淋洗液必须进行浓缩，特别是待测物具有一定的挥发性时，最好使用常压挥发溶剂，否则易导致检测结果偏低。

八、注意事项

1. 先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化。

2. 将柱子必须装平整、均匀。

3. 考虑有限柱填料的吸附量。

4. 可考虑用梯度法分开并洗脱。

5. 对于敏感化合物，可以尝试使用其他吸附剂或改变操作条件。

制备和操作快速柱色谱：

快速柱色谱是一种快速而且相对容易的分离复杂混合物的方法。以下是制备和操作快速柱色谱的一般步骤：

1. 确定待分离混合物的重量。

2. 通过薄层色谱选取合适的溶剂体系。

3. 选择合适的上样方法，如净试样法、溶液法或硅胶吸附法。

4. 选择合适的分离柱和硅胶量。

5. 在通风橱中填充分离柱，注意

在溶剂完全去除之后，紧接着便可以利用核磁共振（NMR）技术来分析所得到的化合物。