丹凤千字科普：dna提取基本步骤及注意事项（详细资料介绍）

引言

果蝇因其染色体数量少、定位基因数量多以及突变性状多样，成为遗传学科研和教学中的重要生物模型。为了深入研究基因的分离、连锁交换、基因表达与调节等现象，提取果蝇的DNA并对其特定基因片段进行扩增是不可或缺的步骤。南开大学遗传学实验课程组针对本科实验教学需求，改进了常规的昆虫DNA提取方法，建立了一种高效提取果蝇DNA的新方法，取得了良好的教学效果。

实验过程

材料：实验中使用的果蝇携带YAP基因。

提取方法：

（1）方法一：采用传统的研磨结合蛋白酶K消化的方式。将果蝇后置于EP管中，加入含蛋白酶K的缓冲液，充分研磨后，进行孵育和离心，取上清液作为DNA模板。

（2）方法二：使用Chelex-100法。将果蝇置于含Chelex-100溶液的EP管中，经过涡旋振荡和离心，取上清液作为DNA模板。

（3）高效法：采用NaOH碱裂解法。将果蝇置于EP管中，加入NaOH溶液进行研磨，然后通过干式恒温器孵育和离心，获得DNA模板。

DNA质量检测：三种方法各进行两次重复实验，共得到9份样品。采用超微量分光光度计测定DNA的质量浓度及A260/A280和A260/A230比值，比较三种方法的提取效果。

PCR扩增：对提取的DNA的YAP序列进行PCR扩增，采用特定的引物序列和PCR反应体系。

PCR产物检测：通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，评价三种方法的基因组DNA的PCR扩增效率。

实验结果

DNA质量检测结果显示：高效法提取的DNA在浓度和纯度方面表现出最佳效果，与常规方法一相比，提取量相当但浓度更高，重复实验的方差较小；与常规方法二相比，高效法的DNA质量浓度明显更高，且数据方差小，提取效果更稳定。通过测定A260/A280和A260/A230的值，进一步验证了高效法提取的DNA纯度较高，蛋白质污染较小，且重复性最好。常规方法二提取的样品蛋白质污染较为严重。

PCR扩增产物检测结果：三种方法提取的DNA扩增产物的电泳条带均明亮且单一，位于1000-1500bp之间，满足实验需求。

本文对比了三种果蝇DNA提取方法，发现高效法不仅提取时间短、操作步骤简单，而且提取的DNA质量更高、纯度更好、重复性更强。相较于传统的两种方法，高效法具有明显优势，尤其适合教学和实验需求。使用高效法为后续的遗传学实验奠定了坚实的基础，有助于推动课程建设和发展。